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3 Material and Methods

Buffers and Solutions Composition

10 % SDS 100 g SDS in 1000 ml A. bidest.

Prehybridisation 3.5 x SSC, 0.1 % SDS, 10 mg/ml BSA in A. bidest

Wash A 1 x SSC, 0.05 % SDS

Wash B 0.06 x SSC

Agarose gels

50 x TAE buffer

40 mM Tris, 20 mM Acetic acid,

2 mM Na

EDTA, pH 8.5

10 x Loading buffer

200 mM Tris-Acetat, 5 mM Na

EDTA,

0,01 % Bromphenolblue, 50 % Glycerin (v/v),

pH 8.0 at 37 ° C for 3 h stirring

1 Kb DNA-ladder

100 µl 1 Kb Plus DNA-Ladder (Invitrogen),

400 µl 10 x loading buffer, 500 µl A. bidest

1% Agarosegel

1 g Agarose, 100 ml 1x TAE-Puffer,

1 µl Ethidiumbromid (10 µg/µl)

1D- and 2D-SDS-PAGE

10 x Laemmli buffer

0.06 M Tris-HCl (pH 6.8), 2 % SDS, 25% Glycerol,

0.2 % Bromphenolblue, 10 % 2β-Mercaptoethanol

Rehydration solution

8 M Urea, 2 M Thiourea, 40 mM DTT, 1 % CHAPS,

0.5 % Pharmalyte

Equilibration solution

50 mM Tris-HCL (pH 8.8), 8 M Urea, 2 M Thiourea,

30 % Glycerol, 2 % SDS, 0.05 % Bromphenolblue

TT buffer 3M Tris-HCl, 0,3 % SDS, 1 mM EDTA; pH 8.5

TE buffer 10 mM Tris/HCl, 1 mM EDTA; pH 8.0

Silver staining

Fixation solution 50 % EtOH, 10 % Acetic acid

Incubation solution

30 % EtOH, 6.8 % NaOAc, 0.5 % Glutaraldehyde,

0.2 % Na

x 5 H

Staining solution 0.1 % AgNO

, 0.02 % Formaldehyde

Developing solution 2.5 % Na

, 0.01 % Formaldehyde

Stop solution 5 % Acetic acid

1 2 ... 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 ... 87 88

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